草莓av|日本高清视频色视频免费|婷婷丁香五月
<dd id="2go2i"><input id="2go2i"></input></dd>
  • <dd id="2go2i"><u id="2go2i"></u></dd>
  • 選擇性JAK3抑制劑PF-06651600的設計

    編譯:肖高鏗/2019-10-26

    原文:Thorarensen, A.; et al. Design of a Janus Kinase 3 (JAK3) Specific Inhibitor 1-((2 S ,5 R )-5-((7 H -Pyrrolo[2,3- d ]Pyrimidin-4-Yl)Amino)-2-Methylpiperidin-1-Yl)Prop-2-En-1-One (PF-06651600) Allowing for the Interrogation of JAK3 Signaling in Humans. J. Med. Chem. 2017, 60 (5), 1971–1993. https://doi.org/10.1021/acs.jmedchem.6b01694.

    JAK3選擇性抑制劑

    JAK激酶(JAK)是I/II型細胞因子受體信號轉導所必需的非受體酪氨酸激酶。JAK家族有四個成員:JAK1、JAK2、JAK3和TYK2。JAK1、JAK2和TYK2普遍表達,而JAK3主要表達于白細胞中。所有的四種JAK同工酶都參與了免疫相關的功能,而JAK1和JAK2還在造血、生長和神經元功能等相關功能中的起著關鍵作用。JAK信號轉導的顯著特征是在細胞因子受體復合物中形成JAK激酶二聚體,細胞因子受體信號所需的JAK二聚體包括JAK1/JAK3,JAK1/JAK2,JAK1/TYK2,JAK2/ TYK2和JAK2/JAK2。

    鑒于JAK家族成員在細胞因子信號轉導中的重要性,促使人們投入大量精力去開發選擇性JAK性抑制劑1,2。幾種抑制劑針對自身免疫性疾病、各種癌癥和骨髓增生性疾已經進入臨床研究階段,迄今獲得了兩項FDA批準:托法替尼(Tofatinib,1)和魯索替尼(Ruxolitinib,2)3。JAK3缺陷的人類SCID患者為JAK3作為靶標提供了強力的驗證,并使得JAK3成為治療性干預的第一批JAK靶標之一。盡管如此,迄今為止報道的大多數抑制劑在JAK家族中缺乏選擇性。因此,JAK3選擇性抑制劑的治療潛力仍有待解決。事實上,人們對公共γ-鏈(common γ-chain)細胞因子信號轉導中JAK1與JAK3所起的作用還存在爭議4。最近,我們證明了選擇性JAK3抑制劑能夠在體外有效地抑制IL-15介導的信號傳導,顯示了選擇性JAK3抑制的治療潛力5。

    Tofacitinib,1 Ruxolitinib,2

    Figure 1. FDA批準的JAK抑制劑

    四個JAK家族成員ATP結合位點的序列比對表明,JAK3僅具有兩個可用于設計選擇性抑制劑的獨特殘基3。此外,JAK亞型的晶體結構研究表明家族成員僅具有極其微小的構象差異6。除了結構生物學信息之外,再加上JAK3與其他家族成員相比具有更高的ATP親和力,意味著高選擇性、ATP競爭性的JAK3抑制劑設計將非常困難5。JAK3中特有的CYS-909殘基提供了以共價鍵設計選擇性抑制劑的機會,克服了ATP結合腔內的高序列相似性和形狀相似性帶來的選擇性抑制劑設計挑戰。這個思路已有文獻報道,并獲得體外實驗數據支持7,8。以共價方式靶向JAK3為藥物設計提供了又一個可選的方式,具有靶標失活后延長藥效學(pharmacodynamics,PD)的潛力。共價修飾也具有其獨特的負面問題,例如可能導致不良藥理作用的脫靶反應性以及非傳統的代謝清除率。我們最近公開了選擇性共價JAK3抑制劑11(PF-06651600)并總結了多個炎癥疾病臨床前體內模型的藥效學研究結果9。這個高度優化的共價JAK3抑制劑可以讓激酶快速地失活且具有最小的化學反應性、良好的ADME性能和整體選擇性。在本文中,我們描述了為發現化合物11所付出的努力。

    共價抑制劑設計的靈感來源

    Tofacitinib與JAK3相互作用的殘基關鍵

    Figure 2. (a)Tofacitinib與JAK3復合物晶體結構提示圍繞N-C軸旋轉可以將酰胺放置在離CYS-909很近的位置。(b)N-Me對構象A的能量影響很大,化合物4的A與B構象的比例為70:30

    最初的設計靈感來源于結構生物學,Tofacitinib與JAK3激酶結構域的復合物晶體結構為與CYS909共價結合的抑制劑設計提供了靈感10。圍繞嘧啶胺N-C鍵旋轉可能會使酰胺取代基緊鄰CYS909,適當設計的親電試劑可以捕獲到親核的半胱氨酸(圖2a)。將丙烯酰胺放在托法替尼母核上得到化合物3?;衔?對JAK3的抑制作用中等,而對JAK家族的選擇性較差,這表明可逆的(Ki)蛋白相互作用是結合親和力(表1)主導力量。 X射線晶體結構分析支持了這一假設:發現吡咯并嘧啶鉸鏈結合片段在活性位點排列整齊,而丙烯酰胺取代的哌啶高度無序(數據未顯示)。由于JAK3在其家族成員中對ATP的親和力最高,所以靶標抑制的Ki成分一定不能成為活性的主要驅動力,而只能通過與CYS909的共價相互作用來提供合適的選擇性。

    Flare視頻演示:初始的靈感來源于旋轉Tofacitinib的嘧啶N-C鍵,可使得酰胺基往CYS909靠近。這提示:適當設計的親電基團可以捕捉到JAK3 CYS909上的巰基。

    為了增加對JAK3的選擇性,必須提高失活速率(inactivation rate, kinact)。采用DFT方法的模擬研究表明11 :去除N-甲基和哌啶順式甲基后得到低能構象的衍生物,它們的親電彈頭(warhead)緊鄰CYS909,見Figure 2b。事實上,化合物4表現出顯著地活性提升(JAK3 IC50 = 56 nM,[ATP] = 1 mM)。在相對較長的測定反應時間條件下,IC50可以很好地衡量不可逆抑制劑的活性強度,因為它與時間無關的kinact/ Ki具有很好地相關性12,13。實際上,在基于細胞的體外和體內試驗中,IC50易于測定、對數轉化后可以體現細胞水平的體內、外功能,這使得IC50成為研究的首選參數?;衔?相對于3具有更高的JAK3選擇性表明kinact參數已經得到顯著改善。后續研究進一步證實化合物4與CYS909形成了共價鍵,并且化合物4的離解速率大于8h。

    JAK3 Figure 3a JAK3 Figure 3b
    a b

    Figure 3. (a)IL-15 PBMC測試與對應的HWB測試之間的相關性。苯胺基丙烯酰胺=藍色,脂族丙烯酰胺=綠色。(b)HWB測試中化合物穩定性:T1/2:小于100分鐘,品紅色; 100-200分鐘,棕褐色; 200-300分鐘,黃色; 大于300分鐘,綠色(n = 107)。

    利用共價“手柄”的高JAK3特異性的概念可以拓展到一系列親電試劑和模組(motif),這些親電試劑和模組將親電試劑放置在CYS909附近,這樣的衍生物類如苯胺基丙烯酰胺化合物6,其顯示出強的JAK3抑制(IC50=29nM)?;衔?和6代表了平行探索的兩個不同系列(即脂族和芳基氨基丙烯酰胺)。雖然每個系列的大多數化合物的活性是通過快速共價失活(即kinact)獲得的,但每個系列都是通過明顯不同的原理實現的。用谷胱甘肽(GSH)作為捕集劑進行的親電性定量實驗表明,這兩個系列具有非常不同的固有化學反應性(芳基氨基丙烯酰胺,T1/2=0.4-4h); 脂肪族氨基丙烯酰胺(4-40 h)14。芳基氨基丙烯酰胺已成功地用于JAK3、EGFR和BTK等靶標的不可逆抑制劑的設計, 目前尚不清楚這些不同的相對反應性會產生何等程度的脫靶效應。當活性測試從基于細胞的PBMC測試轉為人全血(富含蛋白質的培養基)的測試時,反應性的影響變得相當明顯(圖3a)。脂肪族氨基丙烯酰胺在不同的測試之間表現出緊密的相關性,而芳基氨基丙烯酰胺相關性較差。脂肪族氨基丙烯酰胺與芳基氨基丙烯酰胺之間存在著這種轉化差異的原因尚未完全闡明; 然而,上述芳基氨基丙烯酰胺的強反應性可能是主要原因。此外,由兩個系列代表性化合物進行的血液穩定性研究顯示出相似的趨勢(圖3b)。因此,在基于酶和PBMC細胞的測試中,盡管芳基氨基丙烯酰胺類化合物產生了最有效的衍生物,但很明顯,該系列化合物固有的化學反應性水平需要被減弱以便在全血環境中具有最佳的活性。

    口服活性JAK3特異性抑制劑的關鍵參數

    共價結合過程

    Figure 4.JAK3 CYS909共價修飾過程中的各個結合與反應事件

    化合物4的發現闡明了用于將來分子設計至關重要的指導原則。衍生物必須有足夠的Ki以便高效地與ATP競爭并與引發與蛋白的結合,但這只是酶抑制劑的一小部分??焖俚厥Щ?kinact)依然是優化的主要驅動力,因為它是獲得足夠選擇性的決定步驟。從上述關于芳基氨基丙烯酰胺的討論結果可以認為:簡單地提高化學反應性kinact不是富有成效的優化策略。當考慮共價加合物形成中涉及的各個事件時,初始的結合復合物EI不一定代表反應性的復合物EI*(圖4)。因此,增加可逆結合的EI*復合物的濃度應該可以加快共價捕獲。以化合物6為代表的系列化合物,其強效化合物所需的化學反應性增加可能表明存在低濃度的EI*復合物15。增加EI*復合物濃度的設計原理可以用化合物4來說明?;衔?和6與JAK3的復合物晶體結構為分子設計提供了重要指導,重點是反應構象的穩定化(圖5a、b)。這兩種化合物都與CYS909加成,但它們的構像有著明顯不同的丙烯酰胺空間排列。對于4,觀察到丙烯酰胺形成兩個氫鍵:一個鍵合到與配體嘧啶氮相互作用的保守水分子上,第二個鍵合到CYS909酰胺的NH上。雖然這些氫鍵相互作用是在共價鍵形成之后觀察到的,但我們的假設是它們也存在于EI*復合物中,穩定了反應性構象并活化丙烯酰胺以加成到CYS-909中。相反,6中的丙烯酰胺不保留任何這些相互作用,因此需要增加的固有化學反應性來捕獲Cys-909。將這些見解應用于具有環約束的化合物7的設計?;衔?與Jak3的復合物X-射線晶體結構說明哌啶環環化回到連接臂(linker)胺限制了哌啶-N鍵周圍的旋轉,并使哌啶穩定在合適的椅式構象中,以提供用于Cys-909親核攻擊的丙烯酰胺,圖5c。

    JAK3 5TTS JAK3 5TTV JAK3 5TTU
    a(4,PDB:5TTS) b (6,PDB:5TTV) c (7,PDB:5TTU)

    Figure 5. 與JAK3 CYS-909共價結合化合物的晶體結構

    JAK1、JAK2和TYK2的再合成速率相當快,在2-4h的范圍內16。缺乏JAK3的信息促使人們去測量PBMC細胞中的再合成速率,其被確定為3.5h17。這種相對快的再合成速率意味著由于共價抑制而帶來的藥效學(PD)效應延長的潛力超出了經驗范圍。這與諸如FAAH18、BTK19之類靶標的緩慢再合成速率的經驗相反。 在這情況下,相對短期的藥物暴露可在體內提供長期的靶標抑制。對于JAK3,需要具有低清除率的優異藥代動力學性質(PK)以實現持續的靶標失活和高水平的藥效。

    表2. 共價JAK3抑制劑的ADEM性質

    Compd HLM (μL min?1mg?1) RLM (μL min?1mg?1) RRCK (10?6cm/s) Human blood T1/2(min) Rat blood T1/2(min)
    4 8 小于15 8 ~332 98
    7 12.2 70 20 192 164
    8 小于8 25 16 NA NA
    11 8 小于15 15 大于360 161

    盡管肝微粒體判斷的氧化穩定性非常合理(表2),但是化合物4(數據未顯示)和7在大鼠中表現出從中等到差的PK性質。用化合物7和相應的乙酸酯衍生物8進行的一組PK實驗提供了對藥物清除機制的關鍵見解。對于這兩種化合物,在大鼠體內的PK實驗中可以觀察到非常高的清除率(表3)。為了考察氧化代謝對總清除率的貢獻,在進行實驗之前先在用廣譜的細胞色素P450(CYP450)抑制劑氨基苯并三唑(ABT)處理。結果發現乙酸酯8的清除率顯著降低,而丙烯酰胺7仍被高度清除,這說明存在著非CYP450清除途徑。事實上,谷胱甘肽-S-轉移酶(GST)介導的谷胱甘肽(GSH)加成到丙烯酰胺上是造成這種差異的原因20。為了建立SAR模型以理解GST介導的清除,開發了全血穩定性測試方法以便體外方法測量全身GST介導的清除。該方法作為預測工具的有效性最近已獲驗證21。

    表3. 在添加或不添加廣譜CYP450抑制劑ABT的情況下化合物7和8在大鼠體內的藥代清除率

    Compd 7 Compd 8
    CL (mL min?1kg?1),?ABT 109 76
    CL (mL min?1kg?1),+ABT 81 10

    盡管化合物7的PK較差,但仍在體內研究中利用小鼠遲發型超敏反應(DTH)進行了評估,DTH是一種依賴于T細胞的臨床前模型,可用于表征化合物7。在預防性小鼠DTH模型中,第0天通過皮下注射綿羊紅細胞(sRBC)引發小鼠而引起了免疫應答,并在第5天向右后足墊注射了sRBC以引起可測量的炎癥反應。 在整個研究中,化合物7每天給藥一次。 7劑量依賴性地顯著地抑制了右后足墊中的DTH反應,并且在每天兩次低至3 mg / kg給藥劑量時觀察到療效。 在該DTH模型中,化合物1每天兩次每次30 mg / kg的給藥劑量也是有效的(圖6)。 這為我們提供了初步的支持,即選擇性抑制JAK3可以產生相應的體內功能性。

    化合物7的藥效

    Figure 6. 化合物7的藥效。8周齡雌性BALB/c小鼠(Taconic)在第0天通過皮下注射2×107綿羊紅細胞(sRBC)致敏。在致敏前第0天開始口服給藥持續進行至第6天。在右后腳墊上用1×108 sRBC攻擊小鼠,左后腳墊接受無菌PBS注射。在注射之前測量爪的厚度以進行基線測量,然后在24h再次通過卡尺測量。與空白給藥的小鼠相比,爪子厚度以劑量依賴性方式顯著降低。 除另有說明外,所有化合物每天兩次給藥。

    設計口服活性的JAK3專一性抑制劑

    關于調節GST介導清除的設計策略的知識非常有限,一般而言,GST是一類可耐受多種底物的酶22。因為親電體周圍的空間位阻會降低GST催化GSH添加的能力,所以在早期的時候我們試圖在丙烯酰胺中添加取代基來抑制化學反應性。該方法顯著地降低了GST介導的清除率,但不幸的是與JAK3親和力不兼容。 例如,將β-甲基加到4的丙烯酰胺部分會產生幾乎沒有活性的類似物9(IC50大于1000nM)。一種替代方法是加入長程立體空間“手柄”以調節GST結合,氰酰胺系列JAK3抑制劑就使用了這樣的策略23。嘗試將該策略應用于類似物4,探索了在哌啶環不同位置進行甲基取代對活性的影響。關鍵的初始衍生物10(表5)相對于去甲基類似物4顯示出增強的血液穩定性,但不幸的是,其對JAK3的活性較差。我們認為該化合物活性降低的原因是:化合物10與ATP結合口袋中的LEU956殘基側鏈發生空間沖突,導致捕獲CSY-909所需的反應構象不穩定。我們經過模擬發現,將氨基吡咯并嘧啶基團從2位置移至4位置將導致與CSY-909相互作用的高度有利的基態構象,而不會與JAK3的ATP口袋中的任何殘基發生空間碰撞。通過這種構象,我們預期丙烯酰胺羰基與CYS909的NH相互作用會進一步穩定反應性構象,并有可能激活丙烯酰胺進行親核加成。這個設想在化合物11中得以實現,化合物11是一種JAK3高度特異性的抑制劑(IC50 = 33 nM),在1 mM ATP濃度下相對于其他JAK酶沒有相關活性,X-射線晶體學也證明化合物與CYS909發生了共價結合23。體外高活性的化合物11在細胞(IL-15刺激的PBMC,IC50 = 51 nM)和人全血分析(IL-15刺激的HWB分析,IC50 = 197 nM)中均顯示出色的活性(表1)。在將全血IC50轉換為106 nM的游離IC50(在PMBC IC50的2倍以內)之后,化合物11驅動JAK3藥理學的游離藥物濃度的重要性是顯而易見的??梢杂^察到化合物11對其他常見的γ鏈細胞因子信號轉導的抑制作用,而對其他JAK激酶信號相關的細胞因子抑制作用卻很少20。還觀察到細胞水平的功能藥效與JAK3酶與化合物11的結合率相關性很好24。重要的是,2-甲基片段對人肝微粒體、肝細胞和血液的穩定性非常重要。體內藥代動力學研究表明,化合物11在大鼠和狗中的清除率較低,但在猴子中的清除率較快(相對于肝血流量)且口服生物利用度較低(表4)。

    表4. 化合物11在不同種屬中的體內、外PK性質

    Species CL Assay Mouse Rat Monkey Dog Human
    Hepatocyte CLint,u ((μl/min)/million cells) 53 14 7.6 2.1 2.8
    Blood t1/2(min) 大于360 161 37 大于360 大于360
    observed in vivo CLb(mL min-1kg-1) 48 53 42 8.6
    Vss(L/kg) 0.8 1.4 2.6 1.1 1.3b
    in vivo plasma t/2(h) 1.3 0.3 0.7 1.1 1.8c
    po bioavailability(%) 62 85 56 109

    aCLint,u=unbound intrinsic clearance; CLb=blood clearance.;bPredicted from allometric scaling of unbound Vss;cPredicted human half-life

    跨物種的藥代動力學曲線與肝細胞和血液中的穩定性直接相關,這說明應用體外工具來預測體內藥代動力學行為是有價值的?;衔?1的動物(鼠/狗)口服生物利用度較高,這與其體外高被動通透性(RRCK,15 × 10-6cm/s)、高水溶性(大于2mg/mL)和低肝清除率相一致?;衔?1的代謝清除是通過氧化代謝(丙烯酰胺和主要通過CYP3A4的環氧化)和谷胱甘肽共軛(在丙烯酰胺上)介導的?;衔?1的大鼠腎臟和膽管清除率低?;趯η宄龣C制和體內外相關性的理解,預測化合物11的人體血液清除率約為5.6mL min-1kg-1 18。同樣預測人體口服生物利用度約為90%,半衰期約為2小時。這些結果促使我們對哌啶環其他位置甲基取代的影響進行了系統評估(表5)。

    表5.評估小的立體效應對JAK3活性與GST穩定性的影響

    ID Compound Jak3 1mM IC50 (nM) HBlood Stab t1/2(min)
    10
    大于1000 大于360
    11
    33 大于331
    12
    大于10000 185
    13
    大于2478 大于360
    14
    大于10000 大于360
    15
    60 大于250
    16
    2021 103
    17
    大于10000 304
    18
    大于10000 大于360
    19
    56 大于300
    20
    7570 142


    在化合物4-JAK3復合物晶體結構中觀察到優勢的椅式構象環取代的衍生物通常將親電試劑放置在CYS909附近并產生效果 (比如化合物15和19)。GST介導的清除率受到多方面的影響,比如對映異構體構型(化合物14 vs 12)和相對立體化學構型(化合物11 vs 12)對血液穩定性具有顯著影響。這些實踐使我們發現了衍生物19,它通過令人驚訝的遠程空間效應而具有優異的活性 (IC50=56nM)和血液穩定性。

    表6. 化合物11對其它激酶的失活率,這些激酶與JAK3相同位置的位置上具有CYS殘基

    Kinase kinact(s-1) Ki(μM) kinact/Ki(M-1*s-1) IC50(1 mM ATP)(nM)
    JAK3 2.32 6.31 3.68×105 90
    BMX 0.00564 0.543 1.03×104 606
    ITK 0.000144 0.0269 5.35×103 8510
    TXK 0.000487 0.131 3.79×103 193
    TEC 0.00156 0.679 2.30×103 592
    BTK 0.124 62.3 1.99×103 607
    BLK 0.0278 32.4 8.58×102 19000
    HER4 ND ND ND 25200
    EGFR ND ND ND 大于50000
    HER2 ND ND ND 大于50000
    MAP2K7 ND ND ND 大于50000

    IC50值在Carna Bioscience測定

    化合物11對305種激酶具有高選擇性(Invitrogen,圖7)。大約200種激酶在ATP結合位點中含有CYS殘基26。在這組激酶中,11種激酶含有與JAK3相同位置的CYS。對該亞組激酶進行評價時,化合物11對8個靶標顯示出可測量的活性(表6)。當底物ATP濃度為1mM時,這些靶標的IC50顯示出相對于JAK3良好的選擇性。還測定了化合物11對這些靶標的Ki和kinact貢獻。有趣的是,kinact貢獻是JAK3抑制的主要特征,這說明該化合物對親電試劑的排列進行了最佳優化,并且通過CYS-909加成而使激酶快速失活。相反,ITK的失活非常慢,并且其大部分親和力是由Ki貢獻的。非常慢的失活速率需要可觀的滯留時間用于在有高ATP水平的細胞環境中進行捕獲,這表明化合物11是ITK的無效抑制劑。此外,當比較BMX和TXK時,使用嚴格的kinact/Ki作為選擇性的量度忽略了與ATP的競爭對功能結果的不同影響。我們還觀察到化合物11對其他三種激酶(slk、fgr和FLT3)具有非常弱的親和力, 并且這些激酶都沒有以共價方式被抑制。

    7a 7b
    a b

    Figure 7. a(左). 化合物11在1μM時對Invitrogen公司305個激酶的激酶譜分析結果:顏色代表百分抑制劑:深綠色0%;黃色50%;深紅色100%。選擇性Gini系數=0.88。b(右). 測試過的、ATP結合位點含有CYS殘基的激酶。

    化合物11對體外細胞信號傳導的有效抑制清楚地說明JAK3的選擇性抑制可以通過利用異源二聚體JAK1/JAK3對共同的γ鏈細胞因子受體有效地調節信號傳導。此外,在γ鏈信號驅動的多種體內炎性疾病模型(AIA、DTH、CIA和EAE)中報告的11和7的高度療效明確地證明了選擇性JAK3抑制多種人類疾病的治療潛力17。在這些結果的基礎上,選擇化合物11進一步用于臨床評價。

    結論

    總而的來說,本文報導了首款口服活性特異性JAK3抑制劑的設計。用化合物11闡述了如何在不增加化學反應性的情況下達到改善kinact的目的。通過哌啶環甲基取代的遠程立體效應,實現了活性與降低GST介導的清除率相結合的優化目的?;衔?1的代謝穩定性高,以及它的整體特征都使得它適于口服。通過激酶組、HSA和人肝肝細胞譜分析證實化了合物11對其他含有半胱氨酸的蛋白質具有極低的反應性,這說明了特異性抑制JAK3的設計獲得了成功。一系列體外和體內證實了化合物11對JAK3抑制的效果,解決了僅抑制JAK3(作為JAK1 / JAK3激酶異二聚體對中的伴侶)是否就足以抑制其通過γ-共鏈受體介導的細胞因子信號轉導的爭論。目前,化合物11已經進入到治療炎癥疾病的臨床研究階段。

    文獻

    1. Norman, P. Selective JAK1 inhibitor and selective TYK2 inhibitor patents. Expert Opin. Ther. Pat. 2012, 22, 1233?1249.
    2. Wilson, L. J. Recent patents in the discovery of small molecule inhibitors of JAK3. Expert Opin. Ther. Pat. 2010, 20, 609?623.
    3. Clark, J. D.; Flanagan, M. E.; Telliez, J. B. Discovery and development of Janus kinase (JAK) inhibitors for inflammatory diseases. J. Med. Chem. 2014, 57, 5023?5038.
    4. Thoma, G.; Dru?ckes, P.; Zerwes, H. G. Selective inhibitors of the Janus kinase Jak3-Are they effective? Bioorg. Med. Chem. Lett. 2014, 24, 4617?4621.
    5. (7)Thorarensen, A.; Banker, M. E.; Fensome, A.; Telliez, J. B.; Juba, B.; Vincent, F.; Czerwinski, R. M.; Casimiro-Garcia, A. ATP-mediated kinome selectivity: the missing link in understanding the contribution of individual JAK Kinase isoforms to cellular signaling. ACS Chem. Biol. 2014, 9, 1552?1558.
    6. (8) Alicea-Vela?zquez, N. L.; Boggon, T. J. The use of structural biology in Janus kinase targeted drug discovery. Curr. Drug Targets 2011, 12, 546?555.
    7. (9) Goedken, E. R.; Argiriadi, M. A.; Banach, D. L.; Fiamengo, B. A.; Foley, S. E.; Frank, K. E.; George, J. S.; Harris, C. M.; Hobson, A. D.; Ihle, D. C.; Marcotte, D.; Merta, P. J.; Michalak, M. E.; Murdock, S. E.; Tomlinson, M. J.; Voss, J. W. Tricyclic covalent inhibitors selectively target Jak3 through an active-site thiol. J. Biol. Chem. 2015, 290, 4573? 4589.
    8. (10) Tan, L.; Akahane, K.; McNally, R.; Reyskens, K. M.; Ficarro, S.B.; Liu, S.; Herter-Sprie, G. S.; Koyama, S.; Pattison, M. J.; Labella, K. M.; Johannessen, L.; Akbay, E. A.; Wong, K. K.; Frank, D. A.; Marto, J. A.; Look, A. T.; Arthur, S.; Eck, M. J.; Gray, N. S. Development of selective covalent JAK3 inhibitors. J. Med. Chem. 2015, 58, 6589? 6606.
    9. (20) Telliez, J. B.; Dowty, M. E.; Wang, L.; Jussif, J.; Lin, T.; Li, L.; Moy, E.; Balbo, P.; Li, W.; Zhao, Y.; Crouse, K.; Dickinson, C.; Symanowicz, P.; Hegen, M.; Banker, M. E.; Vincent, F.; Unwalla, R.;Liang, S.; Gilbert, A. M.; Brown, M. F.; Hayward, M.; Montgomery, J.; Yang, X.; Bauman, J.; Trujillo, J. I.; Casimiro-Garcia, A.; Vajdos, F. F.; Leung, L.; Geoghegan, K. F.; Quazi, A.; Xuan, D.; Jones, L. H.; Hett, E.; Wright, K.; Clark, J. D.; Thorarensen, A. Discovery of a novel JAK3-selective inhibitor: Functional differentiation of JAK3-selective inhibition over pan-JAK or JAK1-selective inhibition. ACS Chem. Biol. 2016, 11, 3442?3451.
    10. (11) Chrencik, J. E.; Patny, A.; Leung, I. K.; Korniski, B.; Emmons, T. L.; Hall, T.; Weinberg, R. A.; Gormley, J. A.; Williams, J. M.; Day, J. E.; Hirsch, J. L.; Kiefer, J. R.; Leone, J. W.; Fischer, H. D.; Sommers, C. D.; Huang, H. C.; Jacobsen, E. J.; Tenbrink, R. E.; Tomasselli, A. G.; Benson, T. E. Structural and thermodynamic characterization of the TYK2 and JAK3 kinase domains in complex with CP-690550 and CMP-6. J. Mol. Biol. 2010, 400, 413?433.
    11. (12) We evaluated the conformational preference of compounds 4 and 5 with high-level DFT calculations (ref) using the M06-2X method and 6-31G* basis set. These calculations suggest that conformer A where the N?H group is oriented toward the pyrrole ring is energetically favored over the alternative rotational isomer in the gas phase by ~0.6 kcal/mol and resulting in a 70:30 distribution for the two conformers. In contrast for the N-Me group both conformers are almost equally populated in the gas phase with the conformational energy di?erence being only 0.02 kcal/mol.
    12. (13) Maurer, T. S.; Tabrizi-Fard, M. A.; Fung, H. L. Impact of mechanism-based enzyme inactivation on inhibitor potency: implications for rational drug discovery. J. Pharm. Sci. 2000, 89, 1404?1414.
    13. (14) Thorarensen, A. Unpublished results.
    14. (15) Flanagan, M. E.; Abramite, J. A.; Anderson, D. P.; Aulabaugh, A.; Dahal, U. P.; Gilbert, A. M.; Li, C.; Montgomery, J.; Oppenheimer, S. R.; Ryder, T.; Schuff, B. P.; Uccello, D. P.; Walker, G. S.; Wu, Y.; Brown, M. F.; Chen, J. M.; Hayward, M. M.; Noe, M. C.; Obach, R. S.; Philippe, L.; Shanmugasundaram, V.; Shapiro, M. J.; Starr, J.; Stroh, J.; Che, Y. Chemical and computational methods for the characterization of covalent reactive groups for the prospective design of irreversible inhibitors. J. Med. Chem. 2014, 57, 10072?10079.
    15. (18) Schwartz, P. A.; Kuzmic, P.; Solowiej, J.; Bergqvist, S.; Bolanos, B.; Almaden, C.; Nagata, A.; Ryan, K.; Feng, J.; Dalvie, D.; Kath, J. C.; Xu, M.; Wani, R.; Murray, B. W. Covalent EGFR inhibitor analysis reveals importance of reversible interactions to potency and mechanisms of drug resistance. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2014, 111, 173?178.
    16. (19) Siewert, E.; Mu?ller-Esterl, W.; Starr, R.; Heinrich, P. C.; Schaper, F. Different protein turnover of interleukin-6-type cytokine signaling components. Eur. J. Biochem. 1999, 265, 251?257.

    17. (20) Telliez, J. B.; Dowty, M. E.; Wang, L.; Jussif, J.; Lin, T.; Li, L.; Moy, E.; Balbo, P.; Li, W.; Zhao, Y.; Crouse, K.; Dickinson, C.; Symanowicz, P.; Hegen, M.; Banker, M. E.; Vincent, F.; Unwalla, R.;Liang, S.; Gilbert, A. M.; Brown, M. F.; Hayward, M.; Montgomery, J.; Yang, X.; Bauman, J.; Trujillo, J. I.; Casimiro-Garcia, A.; Vajdos, F. F.; Leung, L.; Geoghegan, K. F.; Quazi, A.; Xuan, D.; Jones, L. H.; Hett, E.; Wright, K.; Clark, J. D.; Thorarensen, A. Discovery of a novel JAK3-selective inhibitor: Functional differentiation of JAK3-selective inhibition over pan-JAK or JAK1-selective inhibition. ACS Chem. Biol. 2016, 11, 3442?3451.
    18. (21) Meyers, M. J.; Long, S. A.; Pelc, M. J.; Wang, J. L.; Bowen, S. J.; Schweitzer, B. A.; Wilcox, M. V.; McDonald, J.; Smith, S. E.; Foltin, S.; Rumsey, J.; Yang, Y. S.; Walker, M. C.; Kamtekar, S.; Beidler, D.; Thorarensen, A. Discovery of novel spirocyclic inhibitors of fatty acid amide hydrolase (FAAH). Part 2. Discovery of 7-azaspiro[3.5]nonane urea PF-04862853, an orally efficacious inhibitor of fatty acid amide hydrolase (FAAH) for pain. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2011, 21, 6545? 6553.
    19. (22) Kim, K. H.; Maderna, A.; Schnute, M. E.; Hegen, M.; Mohan, S.; Miyashiro, J.; Lin, L.; Li, E.; Keegan, S.; Lussier, J.; Wrocklage, C.; Nickerson-Nutter, C. L.; Wittwer, A. J.; Soutter, H.; Caspers, N.; Han, S.; Kurumbail, R.; Dunussi-Joannopoulos, K.; Douhan, J., 3rd; Wissner, A. Imidazo[1,5-a]quinoxalines as irreversible BTK inhibitors for the treatment of rheumatoid arthritis. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2011, 21, 6258?6263.
    20. (23) Shibata, Y.; Chiba, M. The role of extrahepatic metabolism in the pharmacokinetics of the targeted covalent inhibitors afatinib, ibrutinib, and neratinib. Drug Metab. Dispos. 2015, 43, 375?384.
    21. (24) Leung, L.; Yang, X.; Strelevitz, T. J.; Montgomery, J.; Brown, M. F.; Zientek, M. A.; Banfield, C.; Gilbert, A. M.; Thorarensen, A.; Martin, E.; Dowty, M. E. Clearance prediction of targeted covalent inhibitors by in vitro-in vivo extrapolation of hepatic and extrahepatic clearance mechanisms. Drug Metab. Dispos. 2017, 45,1?7.
    22. (25) Carron, C. P.; Trujillo, J. I.; Olson, K. L.; Huang, W.; Hamper, B. C.; Dice, T.; Neal, B. E.; Pelc, M. J.; Day, J. E.; Rohrer, D. C.; Kiefer, J. R.; Moon, J. B.; Schweitzer, B. A.; Blake, T. D.; Turner, S. R.; Woerndle, R.; Case, B. L.; Bono, C. P.; Dilworth, V. M.; FunckesShippy, C. L.; Hood, B. L.; Jerome, G. M.; Kornmeier, C. M.; Radabaugh, M. R.; Williams, M. L.; Davies, M. S.; Wegner, C. D.; Welsch, D. J.; Abraham, W. M.; Warren, C. J.; Dowty, M. E.; Hua, F.; Zutshi, A.; Yang, J. Z.; Thorarensen, A. Discovery of an oral potent selective inhibitor of hematopoietic prostaglandin D synthase (HPGDS). ACS Med. Chem. Lett. 2010, 1, 59?63.
    23. (26) Casimiro-Garcia, A. Unpublished results.
    24. (27) Compound 11 is commercially available via Sigma Aldrich (catalog no. PZ0316).
    25. (28) Hett, E. Unpublished results.
    26. (29) Liu, Q.; Sabnis, Y.; Zhao, Z.; Zhang, T.; Buhrlage, S. J.; Jones, L. H.; Gray, N. S. Developing irreversible inhibitors of the protein kinase cysteinome. Chem. Biol. 2013, 20, 146?159.
    草莓av
    <dd id="2go2i"><input id="2go2i"></input></dd>
  • <dd id="2go2i"><u id="2go2i"></u></dd>